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凝膠電泳操作注意事項(xiàng)
  • 發(fā)布日期:2016-04-14     信息來源:      瀏覽次數(shù):3478
    • 1.選用的瓊脂糖:不同品牌的瓊脂糖在質(zhì)量上有較大的差異。劣質(zhì)瓊脂糖會(huì)導(dǎo)致DNA條帶模糊,甚至條帶缺失。因此請盡量選擇質(zhì)量穩(wěn)定可靠的品牌。

      2.選擇適當(dāng)?shù)哪z濃度:
      瓊脂糖凝膠的線性DNA分辨范圍

      3.凝膠制備:配制凝膠和電泳應(yīng)選用相同的1x緩沖液;使用的容器體積至少是凝膠溶液的3倍,以免溶液沸騰時(shí)溢出;制膠過程中盡量趕除氣泡;根據(jù)樣品的濃度和體積選擇適當(dāng)大小的梳子。

      4.選擇適當(dāng)?shù)碾娪揪彌_液:GenStar® SD緩沖液(Cat. No. E101-50)和TBE緩沖液適用于分離比較小的DNA片段,TAE緩沖液(Cat. No. E102-50)適用于分離比較大的DNA片段;緩沖液應(yīng)及時(shí)更新;膠回收純化應(yīng)使用新鮮配制的1x電泳緩沖液,以防核酸酶和DNA雜帶污染。

      5.核酸樣品的準(zhǔn)備:提取的DNA樣品應(yīng)去除蛋白和多余的鹽分等雜質(zhì);PCR樣品應(yīng)盡量在24小時(shí)內(nèi)電泳檢測,否則條帶容易模糊。

      6.上樣緩沖液:所有泳道應(yīng)使用相同的上樣緩沖液,以防止因離子強(qiáng)度不同造成條帶遷移率偏差。

      7.適量上樣:上樣過多會(huì)導(dǎo)致上樣孔超載,出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象;上樣體積過小可能導(dǎo)致條帶亮度不均。
       

      8.電壓及電泳時(shí)間:根據(jù)電泳槽型號(hào)、凝膠濃度、電泳緩沖液種類和目的條帶大小等選擇適當(dāng)?shù)碾妷汉碗娪緯r(shí)間。使用GenStar®SD電泳緩沖液時(shí),電壓設(shè)置為20~35 v/cm膠長;使用TAE或TBE緩沖液時(shí),zui大電壓以不超過20 v/cm膠長為宜。

       

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