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PCR新手指南:Z佳復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)
  • 發(fā)布日期:2016-03-28     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):3508
    • PCR新手指南:*復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)

      *復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是可擴(kuò)增范圍的中間溫度。

      在使用溫度梯度的方法尋找*復(fù)性溫度時(shí),新手往往會(huì)選擇擴(kuò)增產(chǎn)物zui多的溫度條件,然而在此后的非梯度擴(kuò)增時(shí)擴(kuò)增效果又不太理想。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的主要原因是*復(fù)性溫度的選擇標(biāo)準(zhǔn)不對(duì)。本人10多年前做過(guò)數(shù)千個(gè)基因的擴(kuò)增,通過(guò)溫度梯度實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),能擴(kuò)增出來(lái)的溫度范圍一般在3-30度。選擇的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是可擴(kuò)增范圍的中間溫度。
      因?yàn)椋?/span>
      1、擴(kuò)增產(chǎn)物量的影響因素很多,有些是隨機(jī)的。從定量PCR的平臺(tái)期高低的不規(guī)律可以看出來(lái)。
      2、不同儀器、不同位置的溫度及溫度變化曲線是有差異的。按照儀器廠家的出廠標(biāo)準(zhǔn)也準(zhǔn)確性+-0.3度及均勻性+-0.3度
      3、PCR儀進(jìn)行梯度擴(kuò)增時(shí)的溫度準(zhǔn)確性會(huì)更差


      選擇中間溫度可以消除儀器溫度差的影響。

       

      另外,進(jìn)行溫度梯度時(shí)模板量的選擇也是非常重要的。

       

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